定量PCR(qPCR)已成为病毒核酸检测的主要技术。除了高质量的检测试剂和稳定的qPCR仪器外,检测耗材的质量也对结果的准确性和灵敏度有很大影响。那么,如何选择合适的qPCR耗材呢?
1. 高纯度
✅高质量、高纯度、高透明度的聚丙烯(PP)。
在洁净室环境中生产和加工。
为什么 PCR 耗材通常由 PP 材料制成,为什么需要洁净环境?
PCR/qPCR 耗材经常直接接触试剂或样品。聚丙烯 (PP) 具有生物惰性,表面不易附着生物分子。它还具有出色的耐化学性和耐温性,可在 121°C 的温度下进行蒸汽灭菌,并能承受热循环过程中的温度波动。
由于PCR耗材必须不含污染物和抑制剂,因此耗材的质量和清洁度至关重要。虽然高压和辐射可以消除细菌和 DN 酶,但却无法清除灰尘或 DNA 残留物,因为它们可能会抑制 PCR 反应或导致非特异性扩增。即使是微小的污染物也会吸收荧光,并因其光密度而影响信号收集。因此,塑料耗材生产的各个阶段,从成型到最终包装,都必须使用有严格颗粒限制的设备。
2. 高导热性
极薄的壁可优化热传导并缩短生产周期。
壁厚更厚的耗材是否更稳定?
不是,壁厚直接影响导热性。极薄的壁可优化热传导,缩短循环时间。为提高 PCR 效率,确保反应稳定、高效,均匀的超薄 PCR 耗材是理想之选。
3. 高荧光信号反射
对于qPCR,建议使用高质量的白色PCR耗材。
管帽: 透光率的高低直接影响到信号的收集,因此具有出色光学透明度的管帽对于荧光检测至关重要。
如何选择透明、有色和白色PCR管/板?
对于传统PCR,可使用透明或有色PCR 管。彩色透明管便于样品分类和跟踪。但对于 qPCR,建议使用白色耗材,因为定量依赖于灵敏、准确的荧光信号传输。研究表明,白色 PCR 产品比传统的透明管能更好地反映信号,减少孔与孔之间的串扰,优化 qPCR 结果。
4. 高抗污染性
✅管帽应密封严实,具有良好的试管适应性,以减少交叉污染。
✅ PCR 板应具有凸起的孔,以提高密封性。
✅在一侧提供操作把手。盖条上突出的统一抓握区可防止打开过程中的污染。
平孔 PCR 版好还是凸孔 PCR 版好?
最佳选择取决于应用。常见的 PCR 板有平孔和凸孔两种。
平孔板与大多数 PCR/qPCR 仪器兼容,但与自动化系统不兼容。除非与板架一起使用,否则移液过程中的稳定性较低。
凸起孔板可提高薄膜密封性,降低交叉污染风险,适合自动化操作。
5. 高识别度
每个孔都有字母数字标签,便于识别。
切角指示方向。
为什么 96/384 孔板有不同的切角和标签?
切角和标签的目的不同。
切角取决于仪器对定向的要求。
彩色数字代码或蚀刻标记等标签有助于识别各个孔和样品。蚀刻印版可为某些自动化应用提供更好的密封性。
6. 精确体积
通过密封盖或密封膜提高密封性,减少蒸发。
如何选择合适的试管/平板尺寸?
请遵循以下指南:
✅根据实验需求匹配产品
优先选择体积较小的消耗品,它们能改善热传递、减少蒸发并防止过度填充。样品不足可能会蒸发,而过量则会降低导热性,造成溢出和污染。
常见反应容器尺寸:
✅单管/8 管条/12 管条: 0.5毫升、0.2毫升、0.15毫升、0.1毫升
✅96 孔板: 0.2mL、0.15mL、0.1mL 384 孔板: 0.04mL
7. 易于使用
耗材应在不影响密封性的前提下易于操作,同时与仪器参数相匹配。
有裙边与无裙边 PCR 板?
裙边能在机器人处理和移液过程中稳定印板,同时提供机械强度,因此更适合自动化应用。PCR 印板有无裙边、半裙边和全裙边三种类型。
✅ 无裙 - 与大多数热循环仪兼容,但不支持自动化。需要板架以保证移液稳定性。
✅半裙式 - 适用于条形码标记和某些自动化。提高了移液稳定性。
✅全裙式 - 适用于机械性能更好的自动化,适合带有突出加热盖的循环器。移液非常稳定。
哪种 PCR 密封膜是最佳选择?
使用优质产品使密封膜与实验相匹配,既能保护样品不受污染,又能获得可靠的结果。选择耐高温、密封性好、光学清晰度高且易于操作的薄膜。
如何选择移液器吸头?
劣质、不合适的吸头会影响移液器的准确性和精确度。吸头和移液器作为一个系统发挥作用,对正确的液体转移有相匹配的要求。请遵循技术指南并使用推荐的吸头,以确保精度。
吸头有散装袋装、盒装、低留液量、过滤型和自动型。
透明吸头与彩色吸头
大多数吸头由化学惰性透明聚丙烯塑料制成,适用于较宽的温度范围。但材料质量差别很大--高质量的吸头通常使用原生聚丙烯,而便宜的吸头通常使用回收塑料。
此外,还经常添加少量添加剂:
用于体积识别的着色剂,如蓝色(1000μL)、黄色(200μL)。最好是高品质色母粒,而不是廉价的工业颜料。
✅脱模剂,用于使吸头从模具中脱落。更多的添加剂会增加移液过程中的不良反应。
过滤吸头可防止样品和气溶胶污染,同时不影响性能。建议用于基因组应用和 PCR,以避免 DNA/RNA 污染或处理挥发性溶液。
低滞留吸头可优化液体释放,通过标准化的吸头-液体相互作用,在不同性质的液体中提高精确度。
加长吸头可从试管等高而窄的容器中移液。
袋包装与盒包装
盒装在大多数成熟市场都很流行。袋装成本较低,但污染风险较大。
最近出现了节省空间的新型笔芯包装(8-10 个叠放的吸头柱),可减少塑料的使用和对环境的影响。虽然这种包装形式在国内还不常见,但很可能代表着未来的发展趋势。
麦瑞科林以严格的质量控制为后盾,生产一流的 PCR采样耗材。我们的洁净室设施和原生聚丙烯可防止污染,超薄壁优化了板和管的导热性和光学清晰度。我们设计的采样耗材适用于主要的 PCR 仪器品牌,以保证兼容性。通过对最新制造技术的投资以及对纯度、精度和性能的优先考虑,麦瑞科林提供最优质的 PCR 耗材,帮助实验室轻松获得可靠的结果。选择麦瑞科林,您就拥有了一个致力于 PCR 成功的耗材合作伙伴。